Generación de modelos celulares con pérdida de función de RhoE mediante el uso de shRNA-vectores lentivirales

Abstract

[spa] El glioblastoma (GBM) es el tumor primario más común del sistema nervioso central (SNC), y constituye uno de los tumores humanos de peor pronóstico. Los pacientes que padecen esta neoplasia presentan tasas de supervivencia muy bajas. La elevada capacidad de invasión de las células tumorales de GBM representa el principal problema clínico para lograr el control de la enfermedad. Las Rho GTPasas son mediadoras clave de la dinámica del citoesqueleto, muy importante en procesos de migración e invasión celular. RhoE, un miembro atípico de la familia de las Rho GTPasas, es capaz de antagonizar la vía de señalización RhoA / ROCK implicada en procesos de remodelación del citoesqueleto, promoviendo así la motilidad celular. El objetivo principal del presente estudio fue generar modelos celulares estables con pérdida de función de RhoE mediante el uso de shRNA-vectores lentivirales. Asimismo, se caracterizaron los efectos de este silenciamiento producidos sobre el citoesqueleto, proliferación y motilidad celular en los modelos establecidos. La depleción de RhoE fue efectiva y produjo un aumento del área de adhesión celular y la aparición de fibras de estrés robustas. Además, estos cambios fenotípicos produjeron una reducción significativa de la capacidad migratoria de las células. Por otro lado, el silenciamiento de RhoE mostró un aumento en la tasa de proliferación celular. En definitiva, se confirma que RhoE es un objetivo de estudio clave para el desarrollo de nuevas terapias anti-invasivas en GBM.

[eng] Glioblastoma (GBM) is the most common primary tumor of the central nervous system (CNS), and ranks amongst the most deadly human tumors due to its dismal prognosis. Patients with this neoplasm have very low survival rates. The high invasiveness of GBM tumor cells represents the main clinical problem to achieve control of this disease. Rho GTPases are key mediators of cytoskeletal dynamics, very important in cell migration and invasion processes. RhoE, an atypical member of the Rho GTPase family, can antagonize the RhoA / ROCK signaling pathway involved in cytoskeletal remodeling processes, promoting cell motility. The main objective of present study was to generate stable cell models with loss of RhoE function by using shRNA -lentiviral vectors. Likewise, the effects of this silencing produced on the cytoskeleton, proliferation and cell motility in the established models were characterized. RhoE depletion was effective and produced an increase in cell adhesion area and the appearance of robust stress fibers. Furthermore, these phenotypic changes produced a significant reduction of cells' migratory capacity. On the other hand, the silencing of RhoE also promoted an increase in cell proliferation rate Altogether, these findings, confirm that RhoE is a key study target for the development of new anti-invasive therapies in GBM.